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生物样本干重测量全攻略菌体与细胞实验操作指南
奇闻2025-05-19 13:55:54
你是不是刚进实验室,看到师兄师姐对着离心机忙活半天就为了测个"干重",心里直犯嘀咕:这玩意儿到底有啥用?为啥非得折腾到样品"干透"才算数?别急,今天咱们就掰开了揉碎了聊聊这个新手必学的实验技能!
??为什么说干重才是菌体和细胞的"真实体重"???
湿漉漉的样本就像泡发的木耳——含水量能占到80%以上。想准确知道微生物到底长没长胖,??必须把水分蒸发干净??。这就好比买菜要挑净重,搞科研也得看干重才靠谱!
新手最常踩的坑就是图省事:
- 离心时间随便设,结果细胞没甩干净
- 烘干温度没控好,要么烤焦要么没干透
- 称重前没冷却,数据忽高忽低像过山车
??五步搞定干重测量(手把手教学)??
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??样品预处理??
液体样本直接取5-10ml,固体先研磨成渣渣。重点来了:??取样前必须摇匀??!不然测出来的都是"局部体重" -
??离心脱水大赛??
- 普通细菌:3000转/分钟×10分钟
- 真菌菌丝:5000转/分钟×15分钟
- 细胞培养液:2000转/分钟×8分钟
记住!??离心管要对称放??,否则机器会跳舞给你看
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??花样洗涤大法??
样本类型 洗涤液 次数 注意事项 细菌 生理盐水 3次 别用蒸馏水会涨破细胞 真菌 PBS缓冲液 2次 动作要轻柔别搅碎菌丝 哺乳动物细胞 无钙镁PBS 4次 全程冰浴防破裂 -
??烘干变魔术??
推荐两套方案:- ??懒人版??:80℃烘箱过夜(适合时间充裕)
- ??急用版??:105℃烘2小时+真空干燥1小时
划重点:??温度别超110℃??,不然蛋白质会变性给你看
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??称重终极考验??
烘干后的样品要??冷却30分钟??再上秤!实验室老司机都懂:热胀冷缩会让数据漂移5%-10%
??新手必看Q &A??
Q:为啥我测的干重忽高忽低?
A:八成是这三个坑没躲开:
- 离心管没擦干外壁就称重(误差能上10%!)
- 烘干时间不够(真菌菌丝至少要6小时)
- 没做平行实验(至少测3次取平均值)
Q:样品结块怎么破?
A:试试这招:烘干中途用灭菌镊子轻轻捣碎,但??千万别用金属勺??!会刮走样本影响数据
Q:离心机选水平还是角转子?
A:看样本类型:
- 细菌/细胞:角转子(离心力集中)
- 菌丝/大颗粒:水平转子(沉淀更均匀)
??小编踩坑经验谈??
干了三年微生物实验,最惨痛的一次是测乳酸菌干重。当时急着下班,80℃烘了3小时就取出来,结果数据比师兄测的少了40%!后来才发现,这类厚壁菌??必须真空干燥才能彻底脱水??。
建议新手们:
- 买个带观察窗的烘箱,随时监控样品状态
- 每月校准一次天平(别等数据异常才后悔)
- 建立自己的"烘干时间-温度"对照表
记住,干重测量就像煮饭——火候到了自然香,偷工减料准翻车!下次做实验时,不妨多留半小时观察样品变化,这可比盲目照搬protocol管用多了。