（拍大腿）你在实验室是不是经常遇到这种情况？培养出来的菌种混着杂七杂八的微生物，想搞个纯菌种比找对象还难？别慌！今天我就用踩过坑的血泪史，手把手教你3个关键步骤，保准你从"菌种大乱炖"升级到"精准狙击手"！

第一步：打仗先备粮，准备工作别偷懒

（敲黑板）菌种纯化这事儿吧，说白了就是给微生物搞"人口普查"。准备工作要是没做好，后续操作全白搭。先给你们看个真实案例：我师弟去年做实验，因为培养基灭菌不彻底，养出来的菌种比火锅底料还丰富...

??必须备齐的5件套??：

1. 高压灭菌锅（温度必须达到121℃）
2. 无菌操作台（提前开紫外灯30分钟）
3. 酒精灯+75%酒精（划重点！随时消毒）
4. 接种环（用完记得烧红灭菌）
5. 新鲜培养基（别用过期货）

（突然停顿）哎对了，知道为啥老手都爱在酒精灯旁边操作吗？火焰周围会形成上升气流，相当于给实验区域套了个"防护罩"，杂菌想混进来？没门！

第二步：划线分离像绣花，手抖星人也能行

（掏出平板）来来来，看这个划坏的平板标本。新手最容易犯的错就是：要么划得太密集像涂鸦，要么划得太稀疏像鬼画符。记住口诀："前三区要密，后两区要稀，最后一区不回头"。

??正确操作姿势??：

1. 烧红接种环冷却5秒（别急着戳进去！）
2. 第一区划"Z"字（密集点没事）
3. 转90度烧环，从第一区带菌划第二区
4. 重复到第四区（最后一区绝对不回头！）

（突然提高声调）注意看！理想状态是最后几区能看见单个菌落，像撒在芝麻饼上的白芝麻。要是出现"菌落连成片"，八成是接种环带菌量太多，这时候就得用稀释涂布法救场了——说白了就是把菌液稀释后像涂果酱那样抹开。

第三步：挑菌落像选美，眼神要好手要稳

（掏出牙签）到了最关键环节！很多新手在这儿翻车——要么挑到杂菌，要么把菌落戳烂了。上个月有个师妹把霉菌当细菌挑，结果培养出毛茸茸的"蘑菇云"，整个实验室笑到肚子疼...

??挑菌黄金法则??：

1. 选边缘清晰的圆形菌落（别碰长得像蒲公英的！）
2. 用牙签轻轻沾取（别像挖冰淇淋那样用力）
3. 先划新区再挑旧区（防止交叉污染）
4. 做好标记别搞混（血泪教训：我曾在同个平板写5种编号）

（突然拍脑门）哦对了！要是发现平板长满杂菌，别急着哭。可以试试"双层平板法"——先在底层倒普通培养基，凝固后再倒层选择培养基，相当于给目标菌种开VIP通道。

个人实战心得

干了这么多年微生物实验，我最想说的是：菌种纯化这事儿吧，三分靠技术，七分靠心态。新手容易犯的毛病就是急吼吼的，恨不得一天搞定所有步骤。有次我连续划了20个平板都没成功，气得差点把接种环掰弯，结果休息半天回来反而做成了...

（压低声音）偷偷告诉你们个绝招：遇到顽固杂菌污染，试试在培养基里加0.1%的胆盐。这玩意儿就像微生物界的安检仪，能让很多杂菌当场现形。不过具体浓度得看菌种类型，用之前记得查文献！

菌种纯化说到底就是个熟练工种，刚开始可能做得磕磕绊绊，但只要记住这3个步骤的核心逻辑——??严控污染源、精准分离、谨慎挑选??，多练几次准能上手。下次再遇到菌种不纯的情况，你就这么操作试试，保准让导师对你刮目相看！（转身收拾器材）得嘞，今儿就唠到这儿，有啥不明白的随时来问！