实验室菌落混杂？3步分层划线法轻松搞定纯培养！
趣闻2025-05-28 07:03:58
??场景痛点??
生物实验台上，小张盯着培养皿里连成片的菌落发愁——微生物分离实验已经失败三次。隔壁组王教授见状递来接种环："试试分层划线法，跟着我的节奏3分钟完成纯培养！"
一、工具准备与核心原理
[实验准备区示意图：酒精灯/接种环/培养基/菌种试管]
- ??火焰控制区??：酒精灯火焰半径10cm内为无菌操作区
- ??三区划分法??：将培养皿分为3-5个扇形区，通过连续稀释获得单菌落
- ??灭菌关键??：接种环需经历6次灼烧灭菌（操作前/每次划线前/结束后）
二、核心操作流程图解
??步骤1：环形灭菌??
[配图：金属丝烧红状态]
- 右手45°握持接种环，将金属丝置于外焰烧至通红
- 倾斜环柄灼烧连接处，杜绝缝隙残留微生物
??步骤2：梯度划线??
[配图：三区划线示意图]
- ??第一区??：在边缘划3-5条紧密平行线（约占1/4面积）
- ??第二区??：灼烧冷却后，从首区末端划4次"之"字形
- ??第三区??：重复操作，最后一区不得与首区连接
??步骤3：倒置培养??
[配图：30°恒温箱]
- 待菌液吸收后倒置平板，防止冷凝水污染
- 37℃培养18-24小时观察分离效果
三、5大成功要素
- ??灼烧节奏??：每次划线前停留3秒冷却，避免烫死菌种
- ??力度控制??：接种环与培养基呈30°角，轻触表面不划破琼脂
- ??环境监控??：超净台提前紫外灭菌30分钟，操作中减少手臂跨越火焰次数
- ??异常处理??：若出现蔓延菌落，需检查是否漏烧接种环或培养基过湿
- ??艺术级技巧??：训练手腕稳定性，可先在废弃平板上练习"S"型连续划线
??成果验收??
[对比图：失败案例vs标准单菌落]
培养24小时后，理想状态下第三区应出现直径1-2mm的独立圆形菌落。若仍有混杂，建议采用稀释涂布法二次纯化
实验安全贴士：操作全程佩戴护目镜，废弃培养基需121℃高压灭菌30分钟