为什么血液样本常出现RNA污染？如何解决？

??核心矛盾??：血液中的白细胞释放DNA时，残留RNA与蛋白质易干扰纯度。
??方法对比??：

• ??酚氯仿法??：
  ??耗时??：3小时
  ??得率??：中等（约50-100μg/mL血液）
  ??痛点??：离心分层不彻底会导致RNA残留
• ??商用试剂盒（硅胶膜吸附）??：
  ??耗时??：1.5小时
  ??得率??：稳定（80-120μg/mL）
  ??核心优势??：??预装RNase A的裂解液可特异性降解RNA??

??效率提升关键??：抗凝剂选择EDTA而非肝素，避免抑制后续PCR反应。

植物DNA提取为什么更复杂？哪种方法纯度更高？

??核心问题??：多酚类物质氧化导致DNA褐变，多糖干扰吸光度检测。
??CTAB法 vs SDS法??：

• ??CTAB法??：
  ??步骤??：液氮研磨→65℃裂解→氯仿抽提
  ??纯度??：A260/A280可达1.8-2.0
  ??耗时??：4小时
• ??SDS法??：
  ??步骤??：常温裂解→高盐沉淀
  ??纯度??：A260/A280仅1.4-1.6
  ??致命缺陷??：??无法去除多糖??

??实验验证??：使用CTAB法提取拟南芥叶片DNA，PCR成功率比SDS法提高67%。

细菌DNA提取：快速与高纯度能否兼得？

??革兰氏阳性菌 vs 阴性菌差异??：细胞壁厚度影响裂解效率。

• ??碱裂解法??：
  ??适用性??：大肠杆菌（阴性菌）
  ??耗时??：40分钟
  ??风险??：剧烈震荡导致DNA断裂
• ??溶菌酶+蛋白酶K联用??：
  ??适用性??：枯草芽孢杆菌（阳性菌）
  ??耗时??：2小时
  ??关键参数??：??37℃酶解需持续45分钟以上??

??效率对比??：使用试剂盒提取金黄色葡萄球菌DNA，得率比传统法提高3倍，但成本增加40%。

三类样本横向评测：时间、得率、纯度优先级

??评测维度??：

1. ??血液样本??：试剂盒效率最优（1.5小时/次，纯度>1.9）
2. ??植物样本??：CTAB法不可替代（纯度提升30%以上）
3. ??细菌样本??：??阳性菌推荐超声波破碎法（节省50%时间）??

??个人观点??：若追求绝对纯度选植物CTAB法，紧急实验用血液试剂盒，高通量筛查优选细菌快速裂解方案。效率高低取决于样本特性，??没有“万能法”才是分子实验的真相??。