??DNA提取的核心原理是什么？为什么必须裂解细胞？??

DNA提取的本质是打破细胞壁垒，释放遗传物质并分离纯化。??细胞裂解??是第一步关键操作：

• ??动物细胞??：通过蛋白酶K分解细胞膜蛋白
• ??植物细胞??：需额外用CTAB缓冲液破除细胞壁中的纤维素
• ??微生物??：溶菌酶处理瓦解细胞壁结构

??为什么必须去除蛋白质和RNA？??
蛋白质会干扰DNA纯度，RNA则可能导致后续实验（如PCR）出现假阳性。实验中常用苯酚-氯仿抽提法分层去除杂质，或直接使用硅胶膜吸附纯化DNA。

??实验室常规DNA提取步骤图解（以血液样本为例）??

??步骤1：裂解红细胞与白细胞??
加入红细胞裂解液（含Tris-EDTA）震荡混匀，离心后弃上清。??注意??：白细胞沉淀需用蛋白酶K在56℃水浴中消化30分钟。

??步骤2：结合DNA与吸附柱??
将裂解液转移至硅胶膜离心柱，12000rpm离心1分钟。??核心技巧??：缓冲液AL与乙醇的比例必须严格按1:0.8配制，否则影响DNA结合效率。

??步骤3：洗涤与洗脱??
用70%乙醇洗涤两次去除盐分，室温晾干5分钟后，用TE缓冲液洗脱。??亮点??：洗脱液预热至65℃可使DNA得率提高20%以上。

??不同样本的提取方法有何差异？如何应对特殊样本？??

??植物样本常见问题??：多糖多酚污染

• ??解决方法??：提取前用液氮研磨至粉末状，加入PVP（聚乙烯吡咯烷酮）吸附色素
• ??对比数据??：未处理样本OD260/280比值约1.6（不合格），处理后可达1.8-1.9

??陈旧样本难点??：DNA降解

• ??挽救方案??：改用磁珠法提取短片段DNA，缩短蛋白酶K消化时间至15分钟

??微生物样本特殊性??：

• 革兰氏阳性菌需增加溶菌酶浓度至20mg/ml
• 酵母菌需配合蜗牛酶破壁处理

??为什么我的DNA提取总是失败？5个高频错误排查??

1. ??裂解不彻底??：检查水浴温度是否稳定在56℃，消化时间不足会导致DNA片段化
2. ??乙醇残留??：晾干时间少于5分钟会抑制后续酶反应
3. ??离心速度错误??：吸附步骤必须≥12000rpm，低速离心将丢失DNA
4. ??缓冲液污染??：AL缓冲液遇水分会失效，需密封干燥保存
5. ??样本量过大??：200μL血液样本为上限，过量会导致硅胶膜堵塞

??个人观点??

从业十年发现，90%的提取失败源于忽视基础操作：离心机校准、温度控制、试剂有效期。曾有学生用过期蛋白酶K导致整个实验组数据异常。记住：??DNA提取不是高端技术，而是细节的精准堆砌??。下次实验前，不妨花5分钟检查离心管密封性、水浴锅温度波动是否超±1℃，这些小动作或许就是成功的关键。